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Mouse Genotyping Direct PCR Kit

本试剂盒中的组织裂解液能够快速裂解小鼠尾巴, 耳朵或脚趾等组织,释放出的基因组DNA无需提纯即可用于PCR扩增。试剂盒的 PCR 反应体系适用于扩增长度 <1.5kb 的靶序列,产生的平端 及黏端的PCR产物混合物可连接T载体或平端载体,方便进行测序确证。

1. 组织裂解

 

组织

建议组织使用量

小鼠尾尖

5mm~ 1cm

小鼠耳朵

半只

小鼠脚趾

半只

a.   按照待裂解样品的数量配制1×组织裂解液,配制方法如下表。其 Tissue Lysis Buffer 的成分有可能在低温下产生白色絮状沉淀,强烈建议实验前先确保该试剂已升至室温25),沉淀完全溶解。

 

试剂

体积(每样品)

Tissue Lysis Buffer

200 μL

Proteinase

2 μL

b.    向每个含有样品的EP管中加入新鲜组织裂解液,涡旋混匀后,65水浴裂解 30min  组织裂解时,务必将组织完全浸没于裂解液中。水浴结束后,组织块外观可能未能裂解完全,但足量的基因组DNA已经释放进入裂解液,不影响后续的PCR实验

c.   裂解完成后,将样品置于95或沸水浴中加热10min灭活Poteinase

d.   将处理后的样品12000rpm离心5min ,取上清进行PCR实验,未使用的澄清透明上清可-20保存一个月。

 

 2.   PCR 扩增

a. 反应体系:试剂盒的组分解冻后,上下颠倒混匀,在冰浴中配置以下25μL反应体系

 

裂解产物

1 μL

引物 15μM

1 μL

引物 25μM

1 μL

        2× PCR Mix

12.5 μL

ddH2O

9.5 μL

总体积

25 μL

b. PCR程序

 

温度

时间

循环数

94

5 min

1

94

30 s


55

30 s

35

72

2 min


72

7 min

1

c. 琼脂糖凝胶电

PCR扩增产物进行琼脂糖电泳检测。


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